PRV为逆向跨多突触病毒，对动物具有较强感染毒性，动物感染病毒后存活时间一般为3-5天（中枢注射），动物体质不同，存活时间也有差异。外周注射存活时间延长2-4天。因此，病毒注射后，可根据环路连接级数多少在不同时间点取样。在中枢，跨突触数目经验值为： 跨1~2级， 需24~48小时； 跨2~3级，36~ 72小时；需经常查看动物状态，以免动物提前死亡，影响正常取样。

HSV-1-129株为顺向跨多突触病毒，对动物具有较强感染毒性， 动物注射H129后存活时间一般为3~5天（ 中枢注射） ， 动物体质不同， 存活时间也有差异。外周注射存活时间延长2~4天。因此，病毒注射后，可根据环路连接级数多少在不同时间点取样。在中枢，跨突触数目经验值为： 跨1~2级， 需24~48小时； 跨2~3级，36~ 72小时；需经常查看动物状态，以免动物提前死亡，影响正常取样。

（1）注射时针尖堵住了，病毒未注射到目标区域。
（2）跨单突触示踪系统中，需注射辅助病毒，第二病毒注射位点与辅助病毒注射位点未重合。
（3）病毒在存放过程中存放不当或反复冻融，已失去感染活性。

（1）病毒存放使用时，未遵循正确的操作导致产品感染活性降低。
（2）跨单突触示踪系统中，需注射辅助病毒，第二病毒注射位点与辅助病毒注射位点重合度较底。