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Q.PRV注射后什么时候取材?
A.答案
PRV为逆向跨多突触病毒,对动物具有较强感染毒性,动物感染病毒后存活时间一般为3-5天(中枢注射),动物体质不同,存活时间也有差异。外周注射存活时间延长2-4天。因此,病毒注射后,可根据环路连接级数多少在不同时间点取样。在中枢,跨突触数目经验值为: 跨1~2级, 需24~48小时; 跨2~3级,36~ 72小时;需经常查看动物状态,以免动物提前死亡,影响正常取样。
Q.HSV注射后什么时候取材?
A.答案
HSV-1-129株为顺向跨多突触病毒,对动物具有较强感染毒性, 动物注射H129后存活时间一般为3~5天( 中枢注射) , 动物体质不同, 存活时间也有差异。外周注射存活时间延长2~4天。因此,病毒注射后,可根据环路连接级数多少在不同时间点取样。在中枢,跨突触数目经验值为: 跨1~2级, 需24~48小时; 跨2~3级,36~ 72小时;需经常查看动物状态,以免动物提前死亡,影响正常取样。
Q.病毒注射后,未检测到荧光信号的原因?
A.答案
(1)注射时针尖堵住了,病毒未注射到目标区域。
(2)跨单突触示踪系统中,需注射辅助病毒,第二病毒注射位点与辅助病毒注射位点未重合。
(3)病毒在存放过程中存放不当或反复冻融,已失去感染活性。
Q.病毒注射后,检测到的荧光信号较弱的原因?
A.答案
(1)病毒存放使用时,未遵循正确的操作导致产品感染活性降低。
(2)跨单突触示踪系统中,需注射辅助病毒,第二病毒注射位点与辅助病毒注射位点重合度较底。
Q.rAAV储存条件,冻融一次会有多大的损失?
A.答案
-80℃分装储存,冻融一次损失10 % ,应避免反复冻融。保存6-12个月以上的样品,进行试验前,重新测一次滴度。病毒产品解冻后最好保持在冰格中,并尽快使用。如果解冻后的病毒一时用不完,滴度足够高时,4 ℃可保存1-2周。但应尽快使用,一般4 ℃放置一周,滴度会有4-5倍的下降。
Q.AAV光控病毒剌激的频率和强度是多少?
A.答案
剌激频率和强度和病毒没有关系,是研究的问题决定的,一般剌激胞体强度5-10 mW,轴突10-l5 mW ,频率和剌激的细胞特性有关, 5-60 hz不等。
Q.rAAV可以稀释吗?方法如何?
A.答案
可适当稀释,在实验过程中稀释病毒的等渗溶液没有其他特殊要求,常规的动物实验用PBS、生理盐水等即可。稀释后的样品尽量一次性用完。
Q.rAAV包装能力?
A.答案
AAV包装能力可以达到4.9 kb。两端ITR200-300 bp,外源基因插在两个ITR之间,随着插入外源基因的变大, AAV的包装能力将降低。
Q.AAV是否是复制缺陷性的?
A.答案
野生型AAV不能独立存在,需在辅助病毒如腺病毒、单纯瘪彦病毒存在的条件下,才能在感染的宿主细胞中复制合成装配蛋白,产生新的病毒颗粒。重组AAV载体(rAAV)的制备llPAAV的rep.及cap基因由外源基因表达框替代,而只保留了两端的ITR序列,在生产rAAV时,需要提供Rep和Cap蛋白的反式功能以及其他辅助病毒的辅助功能,带有外源基因的重组AAY基因组才会被营救、复制并包装成rAAV病毒。
Q.什么时候选择Lentivirus?
A.答案
慢病毒对分裂细胞和非分裂细胞均有感染能力,整合至细胞基因组并长期稳定表达,体内和体外实验皆可用。
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