腺相关病毒（AAV）作为基因转导和治疗载体，已被广泛使用于疾病基础研究和治疗方案开发。AAV在人体实验中的安全性也被证实。大量研究表明，肺靶向AAV可携带目的基因于目标部位表达，实现目标基因、蛋白的转导。同时，AAV能在肺组织中介导短发卡RNA（shRNA），实现RNA干扰。除此之外，还能利用分子生物学方法构建AAV-Cas9载体，实现目的基因敲除。
不同血清型AAV的肺部感染嗜性
已对不同血清型AAV的天然肺嗜性进行了评估，结果显示肺靶向AAV嗜性根据动物模型的不同而存在差异。在高等灵长类动物模型肺部研究中，推荐AAV1型；在小鼠与低等灵长类动物模型中，推荐AAV5/AAV6型。
图1. 不同血清型在肺中载体表达情况[1]
注：以上数据仅供参考，具体结果以预实验为准
启动子选择
常用启动子：CMV[2]、CAG[3]
AAV在肺中注射方式
AAV拥有多种多样的感染肺部方式，下面以小鼠模型为例介绍几种常用的方法：
1.鼻内滴注
鼻内滴注法是一种直接的AAV感染法，操作简单且对设备要求低，对新手友好。但缺点是AAV颗粒容易沉积在上呼吸道（鼻道、鼻窦、咽）和胃肠道，如果需要有效地感染到下呼吸道，则可能需要更大剂量的AAV才能实现。
2.内镜辅助口腔气管插管手术
内镜气管插管术能够将AAV直接灌入肺中，无外科手术风险，且避免了上呼吸道的病毒颗粒损失。由于几乎所有AAV病毒颗粒都会到达肺内，所以要严格控制AAV的使用量。同时，与鼻内滴注法相比，口腔气管插管术需要一些特殊设备，操作起来也稍有难度。
3.气管内注射
与鼻内滴注相比，气管内注射能够提高AAV进入肺部的效率；而与口腔气管插管法相比，设备更简单，操作更容易。但是，气管内注射具有极高的外科手术风险，包括出血、切口开裂、感染以及较长的恢复期等。不仅如此，由于小鼠气管窄小，也很容易出现失误，将AAV注射到气管周围组织或食管中去。
4.其他
其他注射方式还包括静脉注射和瘤内注射，其中静脉注射还可分为肺静脉注射、尾静脉注射和颈静脉注射。
实例展示
AAV介导的CRISPR-Cas9系统实现对小鼠基因组编辑和癌症建模
载体：AAV9-KPL（sgKras-sgP53-sgLkb1）；
实验动物：Cre依赖Cas9小鼠
注射方式和剂量：鼻腔和气管注射。每只小鼠注入病毒总量1x1011 GCs. Vol: 鼻腔 50ul，气管70ul；
启动子：U6，EFS；
实验方法和结果：通过将携带肺靶向作用及调控元件的AAV病毒（AAV9-KPL和AAV9-sgLacZ）导入小鼠体内，实现对肺腺癌常见易感基因（p53、Lkb1）功能缺失或突变，导致腺癌病理中产生肉眼可见的肿瘤。注射后3周、肺部μCT成像。
图2. 病毒介导的调控元件诱导肺部肿瘤的形成[4]
参考文献：
[1]Carmela Zincarelli, Molecular Therapy, 2008
[2]Meyer-Berg H et al. Stem Cell Research & Therapy, 2020
[3]Kurosaki F et al. Gene therapy, 2017
[4]Randall J. Platt, Cell, 2014
