伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)
实验中我们常使用嗜神经病毒,对神经环路结构和功能进行追踪分析。其中伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)被广泛应用于逆行示踪,解析中枢神经系统对外周器官的调控网络。但受其基因表达水平较低和毒性较高的限制,通常需要短时间内取样以避免动物死亡,并通过免疫组化以放大荧光信号,因此给研究带来了不便。
为了解决表达效率低的问题,中科院深圳先进院徐富强团队等优化了报告基因的表达水平,构建了两个新的逆行跨多突触示踪病毒PRV531和PRV724[1]。文中使用了几种不同的方法以增强荧光蛋白的表达,包括使用强启动子、表达调控因子或将荧光蛋白编码基因的几个拷贝插入病毒基因组中。然而,受红色荧光蛋白的限制,当前的PRV724虽然能有效进行环路示踪,但其红色荧光表达量较低,常常需要进行免疫组化放大信号,为实验带来了不便,增加了实验周期。
增亮版PRV—PRV803
为了弥补这类工具的不足,布林凯斯联合中科院深圳先进院徐富强团队林坤章博士对一系列工具病毒进行改造和筛选,开发了一种新的增亮版PRV--PRV803。PRV803通过插入多个新型红色荧光蛋白拷贝,显著提供红色荧光表达量,成像效果更佳。
PRV803在小鼠外周示踪测试效果图
其注射位点为右侧腿部肌肉,所注射的剂量为3ul/只,表达时间为5天。
参考文献
[1]Jia F, Lv P, Miao H, et al. Optimization of the Fluorescent Protein Expression Level Based on Pseudorabies Virus Bartha Strain for Neural Circuit Tracing. Front Neuroanat. 2019;13:63.